امروز پنجشنبه 31 مرداد 1398

تولید شکل نوترکیب گلوتاردوکسین گیاه برنج در باکتری اشریشیاکلی

Production of recombinant form of rice Glutaredoxin in Escherichia coli

MGJ-17-B-00466

ژنتیک گیاهی

پژوهشی کامل

Fa

 

 

گلوتاردوکسین‌ها (Grx‌ها) ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ‌ﻫﺎﯾﯽ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ پایین ﻫﺴﺘﻨﺪ ﮐﻪ ﺑﺎ داﺷﺘﻦ ﯾﮏ ﮔﺮوه ﺗﯿﻮل-دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪ در ﺟﺎﯾﮕﺎه ﻓﻌﺎﻟﺸﺎن در اﺣﯿﺎ ﺑﺮﮔﺸﺖ‌‌‌‌‌‌‌‌‌ﭘﺬﯾﺮ ﭘﯿﻮﻧﺪﻫﺎی دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪی ﻧﻘﺶ دارﻧﺪ. این پروتئین‌ها توسط آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز توسط مولکول گلوتیون احیا می‌شوند. سپس این پروتئین خود در احیای باندهای دی سولفیدی پروتئین‌های دیگر دخالت دارد. اﯾﺰوﻓﺮم‌ﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻔﯽ از Grx در ﮔﯿﺎﻫﺎن وﺟﻮد دارد. در ﭘﮋوﻫﺶ ﺣﺎﺿﺮ ﺗﻮاﻟﯽ ژن کد‌کننده اﯾﺰوﻓﺮم OsGrx9 از ﮔﯿﺎه ﺑﺮﻧﺞ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﺑﯿﺎﻧﯽ pET28a، ﻫﻤﺴﺎﻧﻪ‌ﺳﺎزی و ﺳﭙﺲ ﺑﻪ ﺳﻮﯾﻪ‌ی ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﺑﺎﮐﺘﺮی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ ﺑﻪ‌ﻧﺎم (DE3) Rosetta ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﺪ. ﺑﺎ ﺗﺤﺮﯾﮏ ﭘﺮوﻣﻮﺗﺮ T7 ﺑﻪ‌وﺳﯿﻠﻪی IPTG، ﻣﯿﺰان ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ His-OsGrx9 در فاز محلول باکتری ﺗﻮﻟﯿﺪ شد و سپس ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از روش ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ تمایلی ﺧﺎﻟﺺ‌ﺳﺎزی ﺷﺪ .ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ اﺣﯿﺎﯾﯽ این اﯾﺰوﻓﺮم ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از اﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﺑﻪ‌ﻋﻨﻮان ﺳﻮﺑﺴﺘﺮای اﻟﮑﺘﺮون ﮔﯿﺮﻧﺪه و حضور DTTیا GSH ﺑﻪ‌ﻋﻨﻮان عوامل اﺣﯿﺎ‌ﮐﻨﻨﺪه مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که Grx9 در محیط این ویترو به‌خوبی فعال می‌باشد. به‌نظر می‌رسد فعالیت این پروتئین در حضور GSH کاملا وابسته به pH محیط می‌باشد.

Glutaredoxins (Grxs) are low-molecular-mass proteins with two cysteins in their active site which are involved in reversible reduction of disulfide bonds. The reduction of Grxs is catalyzed by glutathioen reductase via glithathione. Plants contain several isoforms of Grx. In this study we aim to heterologously express OsGrx9 in E.coli. To this end the gene encoding OsGrx9 was cloned in pET28a. The new construct pET28a-OsGrx9 was transformed to Rosetta (DE3). After inducing T7 promoter with IPTG, proper amount of recombinant proteins were produced in soluble fraction. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography and was analyzed for its ability to reduce Insulin – an electron receptor substrate for Grxs. For this reaction we used DTT or GSH as reducing agent. The results show that OsGrx9 is able to reduce insulin in vitro and the rate of insulin reduction is pH-dependent.

نویسندگان مقاله
ناممحل خدمتپست الکترونیکی

احسان شیخ الاسلام اصفهانی
e shaikholeslam esfehani

نویسنده مسئول

آذر شاه پیری
a shahpiri

نویسنده مسئول

مقالات چاپ شده