دانشگاه ارومیه
چکیده: (1141 مشاهده)
اسانس ریحان (Ocimum basilicum L.) سرشار از ترکیبات فنیل پروپانوئیدی مانند فنیل سینامات، متیل چاویکول، متیل اوژنول و اوژنول میباشد. در مسیر بیوسنتز فنیل پروپانوئیدها ژنهای کلیدی مهمی از جمله سینامات-4- هیدروکسیلاز دخالت دارد. امروزه با توجه به اهمیت پروموتر در دستکاریهای ژنتیکی، انتقال ژن و تولید متابولیتهای ثانویه در گیاهان، آگاهی از توالی پروموتر و عناصر تشکیلدهنده آن ضروری میباشد. بنابراین در این تحقیق با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمراز نامتقارن دمایی (Thermal asymmetric interlaced PCR) توالی ناحیه بالادست ژن سینامات-4- هیدروکسیلاز در گیاه ریحان شناسایی شد. در این تحقیق از دو نوع آغازگر که از نظر طول و دمای اتصال باهم متفاوت هستند استفاده شد تا توالی هدف تکثیر گردد. آغازگرهای نوع اول اختصاصی با دمای اتصال بالا و دارای سه توالی متفاوت بود. آغازگرهای نوع دوم اختیاری (شش عدد) با طول کوتاه و دمای اتصال پایین بود. واکنشهای TAIL- PCR در سه مرحله صورت گرفت که در مرحله دوم و سوم به ترتیب از فرآوردههای رقیق شده مراحل اول و دوم بهعنوان DNA الگواستفاده گردید. بعد از الکتروفورز محصولات PCR و شناسایی باند مورد نظر، قطعه مورد نظر از ژل آگارز استخراج و تلخیص گردید و توالی یابی آن در دو جهت انجام گرفت. آنالیزهای بیوانفورماتیکی توالی با استفاده از برنامههای Softberry, PLANT CARE, PLACE وNeural Network Promoter Prediction انجام گرفت و مشخص شد پروموتر مورد نظر 794 جفت باز طول دارد. ناحیه TATA Box این پروموتر در اطراف نوکلئوتید 35- و ناحیه شروع رونویسی 170 نوکلئوتید بالا دست کدون آغاز ترجمه قرار دارد. چندین ناحیه تنظیمی عملکردی نظیر CAAT box ،W box، G box و I box نیز در توالی پروموتر شناسایی شد. بنابراین پروموتر شناسایی شده (بعد از ارزیابی و تایید نهایی) میتواند در برنامههای انتقال ژن و دستکاریهای ژنتیکی در گیاه ریحان جهت افزایش برخی متابولیتهای با ارزش استفاده شود.
نوع مطالعه:
پژوهشی کامل |
موضوع مقاله:
ژنتیک گیاهی دریافت: 1399/8/19 | پذیرش: 1400/4/12 | انتشار: 1400/6/30