دوره 17، شماره 4 - ( 12-1401 )
جلد 17 شماره 4 صفحات 470-463 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
emamipour A, rezainik H, seifi A. Expression and purification of Cas9 enzyme in E. coli. MGj 2023; 17 (4) : 9
URL: http://mg.genetics.ir/article-1-1749-fa.html
URL: http://mg.genetics.ir/article-1-1749-fa.html
امامی پور علی، رضایی نیک هومن، سیفی علیرضا. بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری E. coli. فصلنامه علمی ژنتیک نوین. 1401; 17 (4) :463-470
دانشگاه فردوسی مشهد
چکیده: (495 مشاهده)
ویرایش ژنوم مبتنی بر فناوری CRISPR/Cas9 (کریسپر) به عنوان ابزار قدرتمندی برای اصلاح گیاهان زراعی بسرعت در حال گسترش است. یکی از مزایای این فناوری امکان دستورزی ژنهای هدف بدون درج DNA خارجی در گیاه است. برای این منظور نیاز است که آنزیم Cas9 و RNA راهنما بصورت کمپلکس پروتئین-RNA (RNP) به سلول گیاهی منتقل شود. از اینرو تولید Cas9 در آزمایشگاه مقدمه آزمایشات کریسپر مبتنی بر RNP است.هدف این پروژه بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری E. coli میباشد. در این پژوهش ژن Cas9 در ناقل بیانی pBADM30 کلون و به باکتری E. coliسویهی CodonPlus منتقل شد. بیان Cas9 با اعمال 2/0 درصد L-Arabinose القا شد و سپس از کل پروتئین محلول جداسازی شد. سپس آنزیم Cas9 توسط با استفاده از ستون میل ترکیبی نیکل تخلیص شد. حضور Cas9 در پروتئین کل و پروتئین تخلیص شده با استفاده از الکتروفورز SDS-PAGE تایید شد. نتایج حاصل از کلونی PCR و هضم دوگانه ی آنزیمی وجود ژن Cas9 در ناقل pBADM30 را تایید نمود. نتایج SDS-PAGE حضور پروتئین با وزن ملکولی حدود 180 kDa را در پروتئین کل نشان داد. همچنین وجود یک تک باند با وزن ملکولی حدود 180 kDa در دو فرگشن بافر شستشو ی حاصل ار رزین نیکل نشان داد که پروتئین هدف به درستی تخلیص شده است. آنزیم Cas9 در باکتری E.coli با موفقیت بیان و تخلیص شد. با توجه به نتایج به دست آمده میتوان گفت که پس از سنجش فعالیت کاتالیکی آنزیم Cas9 میتوان از این آنزیم به همراه RNA راهنما و ساخت کمپلکس RNP و انتقال آن به گیاه با روش پروتوپلاست یا الکتروپوریشن در پژوهش های بعدی استفاده کرد
شماره‌ی مقاله: 9
نوع مطالعه: پژوهشی کامل |
موضوع مقاله:
ژنتیک گیاهی
دریافت: 1400/10/14 | پذیرش: 1401/10/28 | انتشار: 1402/2/2
دریافت: 1400/10/14 | پذیرش: 1401/10/28 | انتشار: 1402/2/2
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
