fa کلونینگ و بیان خارج سلولی آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس بومی چشمه‌های آب گرم ایران درمخمر Pichia pastoris لاکازها (EC 1.10.3.2) توانایی اکسیداسیون دامنه‌ وسیعی از سوبستراهای فنولی و غیر فنولی را دارند. میزبان مخمری با توجه به مزیت‌هایی که در قدرت راه‌انداز، کارایی ترشح، رشد سریع و آسان و عدم سمیت غذایی نسبت به سایر میزبان‌های سلولی دارند، به طور قابل توجهی در تولید مورد استفاده قرار می‌گیرند. در این تحقیق ژن کد کننده‌ آنزیم لاکاز که از باکتری باسیلوس سویه HR30 جداسازی شده بود با ترجیح کدونی برای مخمرPichia pastoris سنتز شده و سپس در پلاسمید بیانی مخصوص مخمر پیکیا پاستوریس کلون شده و از طریق روش الکتروپوریشن به داخل مخمر انتقال یافت. برای تائید کلونینگ از روش کلونی PCR و هضم آنزیمی استفاده شد و قطعه 1542 جفت بازی مشاهده شد. سپس ژن مورد نظر تحت شرایط دمایی و غلظت‌های متفاوت از سولفات مس بیان شد. نتایج نشان داد که میزان تولید پروتئین در غلظت‌های یک، یک و نیم و دو میلی‌مولار از سولفات مس (به عنوان کوفاکتور برای آنزیم) و درجه حرارت‌های 20، 25 و 30 درجه‌ سانتی‌گراد محیط کشت متغیر بود. کاهش دمای محیط کشت تا مرز 20 درجه‌ سانتی‌گراد و غلظت دو میلی‌مولار ازسولفات مس توانست باعث بهبود فرایند تاخوردگی مجدد و فعالیت آنزیم لاکاز شود. 1 10 http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-109-336&slc_lang=fa&sid=1 محمد پرند محمد پرند 10031947532846003255 10031947532846003255 Yes سید امید رعنایی سیادت سید امید رعنایی سیادت 10031947532846003256 10031947532846003256 No احد یامچی احد یامچی 10031947532846003257 10031947532846003257 No