Modern Genetics Journal
فصلنامه علمی ژنتیک نوین
MGj
General
http://mg.genetics.ir
1
admin
2008-4439
2008-4439
8
14
8888
13
fa
jalali
1395
5
1
gregorian
2016
8
1
11
2
online
1
fulltext
fa
معرفی ژن جدید موثر در تولید بیوفیلم در باکتری Bacillus subtilis
A new gene involving in biofilm formation of Bacillus subtilis
باکتری Bacillus subtilis بهدلیل داشتن قابلیتهای بالا در کنترل بیولوژیک بیماریهای گیاهی و همچنین تولید انواع متابولیتهای مختلف همواره مورد توجه دانشمندان بوده است. یکی از خصوصیات مهم این باکتری تولید بیوفیلم میباشد. علیرغم مطالعات زیاد صورت گرفته در خصوص تولید بیوفیلم، مکانیسم تشکیل آن هنوز بهطور کامل شناسایی نشدهاست. بر این اساس، این تحقیق با هدف شناسایی ژنهای جدید احتمالی موثر در تشکیل بیوفیلم انجام گرفت. در این راستا، موتاسیونزایی با استفاده از ترانسپوزون mini-Tn10 بهمنظور شناسایی ژنهای جدید مرتبط با تولید بیوفیلم در سویه B. subtilis 168 انجام و موتانت فاقد قدرت تولید بیوفیلم انتخاب شد. مقایسه توالی قطعه جهشیافته در سویه موتانت با توالی تیپ وحشی در بانک ژن نشان داد که موتاسیون در ژن ykuT رخ داده است. با توجه به عدم توانایی سویه موتانت در تشکیل بیوفیلم نسبت به سویه تیپ وحشی، نتایج تحقیق حاضر برای اولین بار نشان داد که ژن ykuT در کنار سایر ژنهای معرفی شده قبلی، یکی از ژنهای مهم دخیل در تولید بیوفیلم باکتری B. subtilis میباشد. در ادامه، تاثیر محیط کشتهای مختلف آزمایشگاهی بر بیان ژن ykuT با استفاده از روش دستهبندی سلولهای فعال شده فلورسنت (FACs) مورد ارزیابی قرار گرفت. بدین منظور پروموتر این ژن به ابتدای ژن gfp در پلاسمید pSG1151 الحاق و میزان تظاهر ژن در محیط کشتهای مختلف بررسی شد. نتایج نشان داد که محیط حداقل Spizizen salt موجب کاهش و محیط کشتهای TYG، TYN و 2xSG موجب افزایش بیان این ژن میشوند. در بررسی تاثیر ژن ykuT بر بیان اپرون spoIIA (فعال در اسپورزایی) و ژن hag (موثر در تحرک) باکتری B. subtilis، پروموتر ژنهای مورد مطالعه به سویه تیپ وحشی B. subtilis 168 و موتانت ykuT::spc∆ انتقال داده شد. نتایج نشان داد که بیان اپرون spoIIA و ژن hag تحت تاثیر ژن ykuT قرار داشته و عدم وجود ژن ykuT موجب توقف بیان ژن موردنظر شد، در نتیجه موتانت حاصل فاقد قدرت تولید اندوسپور و تحرک بود. مقایسه تحرک و اسپورزایی سویههای تیپ وحشی و موتانت، همچنین عکسبرداری با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت نتایج بالا را تایید کرد.
R
esearcher has tented to focus on Bacillus subtilis due to having high potentials in biological control of plant diseases and also production of wide range of different metabolites. Biofilm production is known as one of the most important properties of this bacteria. In spite of huge studies performed on biofilm formation of this bacterium, mechanism of biofilm formation is not identified completely. So, the main objective of the present study was to explore new possible gene(s) involved in biofilm formation of B. subtilis. For this, mutation using mini-Tn10 was carried out in B. subtilis 168, and mutants without biofilm formation ability were selected. Comparing of mutated fragment sequence in mutant and wild type showed that the mautation has occurred in the ykuT gene. As the mutant could not form complete biofilm compared to the wild type strains, ykuT gene was introduced as one of the important genes in biofilm formation of B. subtilis for the first time in this study. The effect of different media on expression of ykuT gene was evaluated using FACs method. To do this, the promoter of the gene was inserted in the upstream region of the gfp gene in the pSG1151 and expression was studied. Our results indicated that Spizizen salt medium decreased the ykuT gene expression, whereas TYG, TYN and 2xSG media increased it. To evaluate the effects of ykuT gene on spoIIA (operon involved in sporulation) and hag (gene involved in motility) activities in B. subtilis, pSG1151 vectors containing spoIIA and hag promoters, were transferred to the wild type B. subtilis 168 and mutant strains (∆ykuT::spc). The results confirmed that the ykuT significantly affects the spoIIA and hag expression, as lack of ykuT expression caused silencing of the mentioned operon and gene. Comparison of sporulation and motility test between wild type and mutant, also photography using fluorescence microscopy confirmed the mentioned results.
بیوفیلم,ترانسفورماسیون,ژن ykuT,موتاسیون,Bacillus subtilis
Bacillus subtilis, Biofilm, ,Mutation, Transformation, ykuT gene
245
259
http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-109-423&slc_lang=fa&sid=1
مریم خضری
مریم خضری
10031947532846002521
10031947532846002521
No
مسعود احمد زاده
مسعود احمد زاده
10031947532846002522
10031947532846002522
No
غلامرضا صالحی جوزانی
غلامرضا صالحی جوزانی
10031947532846002523
10031947532846002523
No
روح اله شریفی
روح اله شریفی
10031947532846002524
10031947532846002524
No