fa جداسازی و تعیین خصوصیات پروموتر ژن سینامات 4-هیدروکسیلازدر ریحان ژنتیک گیاهی Subject 01 پژوهشی کامل Applicable <span dir="LTR"></span>اسانس ریحان (<em><span dir="LTR">Ocimum basilicum L</span></em><span dir="LTR">.</span>) سرشار از ترکیبات فنیل پروپانوئیدی مانند فنیل سینامات، متیل چاویکول، متیل اوژنول و اوژنول می&shy;باشد. در مسیر بیوسنتز فنیل پروپانوئیدها ژن‌های کلیدی مهمی از جمله سینامات-4- هیدروکسیلاز دخالت دارد. امروزه با توجه به اهمیت پروموتر در دستکاری‌های ژنتیکی، انتقال ژن و تولید متابولیت&shy;های ثانویه در گیاهان، آگاهی از توالی پروموتر و عناصر تشکیل‌دهنده‌ آن ضروری می&shy;باشد. بنابراین در این تحقیق با استفاده از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز نامتقارن دمایی (<span dir="LTR">Thermal asymmetric interlaced PCR</span>) توالی ناحیه بالادست ژن سینامات-4- هیدروکسیلاز در گیاه ریحان شناسایی شد. در این تحقیق از دو نوع آغازگر که از نظر طول و دمای اتصال باهم متفاوت‌ هستند استفاده شد تا توالی هدف تکثیر گردد. آغازگرهای نوع اول اختصاصی با دمای اتصال بالا و دارای سه توالی متفاوت بود. آغازگرهای نوع دوم اختیاری (شش عدد) با طول کوتاه و دمای اتصال پایین بود. واکنش&shy;های <span dir="LTR">TAIL- PCR</span> در سه مرحله صورت گرفت که در مرحله دوم و سوم به ترتیب از فرآورده‌های رقیق‌ شده مراحل اول و دوم به‌عنوان <span dir="LTR">DNA</span> الگواستفاده گردید. بعد از الکتروفورز محصولات <span dir="LTR">PCR</span> و شناسایی باند مورد نظر، قطعه مورد نظر از ژل آگارز استخراج و تلخیص گردید و توالی یابی آن در دو جهت انجام گرفت. آنالیزهای بیوانفورماتیکی توالی با استفاده از برنامه‌های <span dir="LTR">Softberry, PLANT CARE, PLACE</span> و<span dir="LTR">Neural Network Promoter&nbsp; Prediction </span>&nbsp;انجام گرفت و مشخص شد پروموتر مورد نظر 794 جفت باز طول دارد. ناحیه <span dir="LTR">TATA Box</span> این پروموتر در اطراف نوکلئوتید 35- و ناحیه شروع رونویسی 170 نوکلئوتید بالا دست کدون آغاز ترجمه قرار دارد. چندین ناحیه تنظیمی عملکردی نظیر <span dir="LTR">CAAT box</span> ،<span dir="LTR">W box</span>، &nbsp;<span dir="LTR">G box</span> و<span dir="LTR"> I</span> <span dir="LTR">box</span> &nbsp;نیز در توالی پروموتر شناسایی شد. بنابراین پروموتر شناسایی شده (بعد از ارزیابی و تایید نهایی) می&shy;تواند در برنامه&shy;های انتقال ژن و دستکاری&shy;های ژنتیکی در گیاه ریحان جهت افزایش برخی متابولیت&shy;های با ارزش استفاده شود.<span dir="LTR"></span> Basil (<em>occimum basilicum </em>L.) essential oil is a rich source of phenylpropaniod compounds such as phenyl cinnamate, methyl chavicol, methyl eugenol and eugenol. Cinnamate-4-hydroxylase (C₄H) is one of the important key genes involved in phenylpropanoid biosynthesis. Nowadays considering the importance of the promoter in genetic manipulation, gene transfer and the production of secondary metabolites in plants, identification of the promoter sequence and its constituent elements is necessary. Hence, in the current investigation, thermal asymmetric interlaced PCR (TAIL-PCR) was used to identify the upstream sequences of the <em>C₄H </em>gene in <em>O.</em> <em>basilicum </em>L. In this method two series of primers differing in length and annealing temperature were applied to amplify the target sequence: three specific primers with high annealing temperature and different sequences and six random primers with a short length and low annealing temperature. TAIL-PCR was performed in three stages which in the second and third stages, diluted PCR product of the first and second stages were used respectively as the template. After electrophoresis of the PCR products and identification of the interested band, the fragments were extracted and purified from the agarose gel, and sequenced in both directions. Subsequent bioinformatic analysis of the sequenced fragment using PLACE, PLANT CARE, Softberry and Neural Network Promoter Prediction softwares revealed a sequence with a length of 794 bp. The TATA Box of the promoter was recognized around nucleotide -35 and the transcription initiation site was 170 nucleotides upstream of the initiation codon. A group of various putative functional regulatory elements such as CAAT box, W box, Gbox and I box were also identified in the promoter. Therefore, the promoter detected (after validation), may be used in the gene transfer and manipulation programs in basil for enhancement of the valuable metabolites. ریحان, پروموتر, سینامات-4- هیدروکسیلاز, TAIL-PCR basil, promoter, cinnamate-4-hydroxylase, TAIL-PCR 211 218 http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-48-1&slc_lang=fa&sid=1 Roya karimi goyjelo رویا کریمی گویجه لو karimiroya35@gmail.com 10031947532846005991 10031947532846005991 No Urmia University دانشگاه ارومیه Babak Abdollahi Mandoulakani بابک عبدالهی مندولکانی b.abdollahi@urmia.ac.ir 10031947532846005992 10031947532846005992 Yes Urmia University دانشگاه ارومیه