fa بیان سلولاز CMC3 تحت کنترل راه‌اندازهای متانل اکسیداز و الکل اکسیداز در مخمر Pichia pastoris ژنتیک گیاهی Subject 01 پژوهشی کامل Applicable <h1 dir="RTL" style="text-align: justify;"><span style="font-family:tahoma;"><span style="font-size:14px;">راه‌اندازهای کوتاه و قدرتمند از اجزای کلیدی بیان موفق پروتئین نوترکیب در میزبان‌های مختلف از جمله مخمر &nbsp;<em><span dir="LTR">Pichia pastoris</span></em>می‌باشند. در این مطالعه بیان خارج سلولی آنزیم سلولاز بتااندوگلوکاناز (<span dir="LTR">CMC3</span>) تحت کنترل راه‌انداز متانول‌اکسیداز (<span dir="LTR">MOX</span>) و الکل‌اکسیداز 1 (<span dir="LTR">AOX1</span>) با تحت خوراک‌دهی متانول مورد بررسی قرار گرفت. به‌منظور حذف اثر تعداد کپی، کلون‌های نوترکیب حاوی یک نسخه جای‌گیری در ژنوم با استفاده از روش <span dir="LTR">Real-Time PCR</span> شناسایی و مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج حاصل از سنجش فعالیت آنزیم، زایموگرافی و <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> بیان قدرتمند و قابل مقایسه سلولاز تحت کنترل هر دو راه‌انداز <span dir="LTR">MOX</span> و <span dir="LTR">AOX1</span> در این مخمر را نشان دادند. نتایج بیان قوی <span dir="LTR">CMC3</span> نشان داد که راه‌انداز کوتاه <span dir="LTR">MOX</span> می‌تواند با موفقیت برای تولید پروتئین نوترکیب با بیان بالا مورد استفاده قرار گیرد.</span></span></h1> Small and powerful promoters play a key role in recombinant protein expression in different hosts including <em>Pichia pastoris</em>. In the present study, expression of cellulase beta endoglucanase <em>CMC3</em> gene was studied under the control of the alcohol oxidase 1 (AOX1) and methanol oxidase (MOX) promoters, with the methanol feeding, in the yeast <em>Pichia pastoris</em>. To avoid the gene dosage effect, colonies harbored single copy of target constructs were screened by Real-Time PCR method. The results of enzymatic assay, zymogaphy and SDS-PAGE for the culture of single copy harboring transformants showed powerful, comparable expression of CMC3 under the control of both MOX and AOX1 promoters. High-level expression of recombinant CMC3 under control of the MOX promoter indicated that this small, new powerful promoter could be considered as a promising tool for recombinant protein production in the yeast <em>Pichia pastoris</em>. پروتئین نوترکیب, سلولاز,راه‌انداز,Pichia pastoris cellulose, Pichia pastoris, promoter, recombinant protein 13 23 http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-1-5&slc_lang=fa&sid=1 M Mombeni محسن ممبنی 1003194753284600161 1003194753284600161 No گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج Arjmand ساره ارجمند 1003194753284600162 1003194753284600162 No مرکز تحقیقات پروتئین، دانشگاه شهید بهشتی، پردیس عمومی، تهران SO Ranaei Siyadat سید ‌امید رعنایی‌سیادت 1003194753284600163 1003194753284600163 No مرکز تحقیقات پروتئین، دانشگاه شهید بهشتی، پردیس عمومی، تهران A Abassi علیرضا عباسی 1003194753284600164 1003194753284600164 No گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج H Alizadeh هوشنگ علیزاده 1003194753284600165 1003194753284600165 Yes گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج