دوره 16، شماره 3 - ( 6-1400 )
جلد 16 شماره 3 صفحات 270-263 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Heydari gharehsoo F, Moshtaghi N, Meshkani B, Malekzadeh-shafarudi S. Optimization of cel6B enzyme expression in E. coli BL21(DE3). MGj 2021; 16 (3) :263-270
URL: http://mg.genetics.ir/article-1-1637-fa.html
URL: http://mg.genetics.ir/article-1-1637-fa.html
حیدری قره سو فهیمه، مشتاقی نسرین، مشکانی براتعلی، ملکزاده شفارودی سعید. بهینه سازی بیان آنزیم سلوبیوهیدرولاز cel6B در باکتری E. coli BL21(DE3). فصلنامه علمی ژنتیک نوین. 1400; 16 (3) :263-270
دانشگاه فردوسی
چکیده: (908 مشاهده)
مصرف انرژی و تاثیر آن بر محیط‌زیست یکی از بزرگترین چالش‌های بشر است و تولید اتانول زیستی یا سایر مواد شیمیایی به وسیله هیدرولیز آنزیمی سلولز می‌تواند تاثیر مهمی در جایگزینی سوختهای فسیلی و کاهش تولید CO2 در اتمسفر داشته باشد. آنزیم Cel6B از باکتری گرمادوست Thermobifidia fusca، یک CBHII متعلق به خانواده بی سلولازهاست که تا C° 55 مقاوم به حرارت است. به علت میزان پایین تولید این آنزیم در میزبان اولیه جهت مصارف صنعتی، ابتدا باید تولید آن در سیستم‌هایی نظیر باکتری، بهینه‌سازی شود. در این پژوهش، از آغازگرهای اختصاصی جهت تایید وجود ژن Cel6B در وکتور PSZ143 استفاده شد سپس وکتور PSZ143 حاوی ژن Cel6B با روش شوک حرارتی به سلول‌های مستعد E. coli BL21(DE3) منتقل شد. پس از استخراج پروتئین، بیان یک پروتئین با وزن مولکولی 59.6 KDa با استفاده از ژل الکتروفورز SDS-PAGE تایید شد. نتایج بهینه‌سازی تولید پروتئین نشان داد که بهترین زمان و بهترین غلظت IPTG برای القا و بیان پروتئین در باکتری به ترتیب 6 ساعت بعد از القا و 8/0 میلی‌مولار است. فعالیت آنزیم سلوبیوهیدرولاز با استفاده از سوبسترای پنبه پیش‌تیمار شده با اسید فسفریک در باکتری لیزشده با روش DNS مورد بررسی قرار گرفت. فعالیت آنزیمی cel6B در هیدرولیز سلولز، در لیزات باکتری و محیط‌کشت آن پس از 6 ساعت القا با 8/0 میلی‌مولار از IPTG ، به ترتیب 21/1 و U(mmol/min) / ml 07/0 به دست آمد و در نهایت نشان داده شد که میزان بیان پروتئین cel6B به علت پایین بودن شاخص CAI (انطباق کدونی) و تفاوت کدون‌های مورد ترجیح E. coli، پایین است. همچنین با بررسی توالی سیگنال بومی این ژن در سرویس‌دهنده Signal P4.1 عدم قابلیت ترشح این پروتئین در E. coli اثبات شد.
نوع مطالعه: پژوهشی کامل |
موضوع مقاله:
ژنتیک ریزسازواره
دریافت: 1399/2/6 | پذیرش: 1400/6/28 | انتشار: 1400/6/30
دریافت: 1399/2/6 | پذیرش: 1400/6/28 | انتشار: 1400/6/30
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
