Modern Genetics Journal
فصلنامه علمی ژنتیک نوین
MGj
General
http://mg.genetics.ir
1
admin
2008-4439
2008-4439
8
14
8888
13
fa
jalali
1394
11
1
gregorian
2016
2
1
10
4
online
1
fulltext
fa
ساخت و انتقال سازههای حاوی ژن پروانسولین به منظور بیان گذرا در یونجه
Construction and transformation of cassettes containing human Proinsulin gene for transient expression in alfalfa plants
در حال حاضر میلیونها نفر در سراسر جهان برای گریز از اثرات کشنده بیماری دیابت به تزریق دائمی انسولین نیاز دارند. توسعه سیستمی که بتواند این دارو را با قیمت و فراوانی مناسب در اختیار مصرفکنندگان قرار دهد، امری ضروری است. امروزه با توسعه تکنیک مهندسی ژنتیک، انسولین انسانی در باکتریها و مخمر تولید میشود ولی به علت معایب تولید پروتئینهای نوترکیب در این موجودات، مانند هزینه نسبتا بالا، امکان آلودگی با پروتئینهای غیرضروری و نیاز به مراحل هزینهبر خالصسازی، بخشی از تحقیقات بر روی تولید پروتئینهای نوترکیب در گیاهان متمرکز شده است. پژوهش حاضر به منظور بیان گذرای دو سازه متفاوت در برگهای یونجه صورت گرفتهاست. سازه pLPC شامل یک ژن الحاقی به صورت زیرواحد B سم Heat-labile باکتری E. coli LTB))-پروانسولین-پنتراتین و سازه pEPC حاوی یک الحاق ژنی دیگر به صورت پپتید راهنمای اکستنسین-پروانسولین-پنتراتین، ساخته و از طریق برش آنزیمی و توالییابی مورد تایید قرار گرفتند. سازهها به اگروباکتریوم سویه LBA4404 منتقل و از طریق اگرواینفیلتراسیون به گیاه یونجه انتقال یافتند. بیان ژن و تولید پروانسولین فعال در برگهای گیاه بهوسیله RT-PCR با آغازگرهای اختصاصی ژن پروانسولین و به وسیله کیت تشخیص طبی Mono-bind تایید شد. میزان پروانسولین فعال تولیدی در برگهای یونجه تیمار شده با سازههای pLPC و pEPC بهترتیب 76 و 6/71 نانوگرم در هر گرم برگ تر یونجه بود.
urrently, millions of people all over the world for escaping the lethal effects of diabetes require persistent injections of insulin. Thus, to develop a system with low cost and high production of insulin that can fit into the consumers, is essential. With evolving genetic engineering techniques, production of human insulin in bacteria and yeasts were feasible, but due to drawbacks of producing recombinant proteins in those organisms including high cost, the possibility of contamination with toxic proteins and costly purification steps, most research has focused on the production of recombinant proteins in plants. Therefore, this investigation was done to express transiently the human proinsulin in alfalfa leaves by two different constructs. Construct pLPC as a fusion gene B subunit heat liable toxin of E.coli - proinsulin - penetratin and constructs pEPC incorporation into a peptide containing extensin leader - Proinsulin - penetratin. These constructs were transferred into Agrobacterium strain LBA4404 and agroinfiltration. Gene expression in alfalfa leaves was attested by RT-PCR and specific primers. The production of active proinsulin was confirmed by medical diagnostic mono-bind kits. The amount of production of active proinsulin in agroinfiltrated alfalfa leaves with constructs pLPC and pEPC were estimated 76 and 71.6 nano-grams per gram of fresh alfalfa leaves respectively.
اکستنسین,اگرواینفیلتراسیون,پنتراتین,زیرواحد B سم Heat-labile ,E. coli
Agroinfiltration, Extensin, E. coli, Penetratin, ,Subunit heat liable toxin
461
468
http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-109-383&slc_lang=fa&sid=1
فرگل مظاهری
فرگل مظاهری
10031947532846002365
10031947532846002365
No
بدرالدین طباطبایی
بدرالدین طباطبایی
10031947532846002366
10031947532846002366
No
اسماعیل قاسمی
اسماعیل قاسمی
10031947532846002367
10031947532846002367
No
منصور امیدی
منصور امیدی
10031947532846002368
10031947532846002368
No
سیروس قبادی
سیروس قبادی
10031947532846002369
10031947532846002369
No
هوشنگ علیزاده
هوشنگ علیزاده
10031947532846002370
10031947532846002370
No