fa تولید شکل نوترکیب گلوتاردوکسین گیاه برنج در باکتری اشریشیاکلی ژنتیک گیاهی Subject 01 پژوهشی کامل Applicable <h1 dir="RTL" style="text-align: justify;"><span style="font-family:tahoma;"><span style="font-size:14px;">گلوتاردوکسین‌ها (<span dir="LTR">Grx</span>‌ها) ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ‌ﻫﺎیﯽ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ پایین ﻫﺴﺘﻨﺪ ﮐﻪ ﺑﺎ داﺷﺘﻦ یﮏ ﮔﺮوه ﺗﯿﻮل-دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪ در ﺟﺎیﮕﺎه ﻓﻌﺎﻟﺸﺎن در اﺣﯿﺎ ﺑﺮﮔﺸﺖ‌‌‌‌‌‌‌‌‌ﭘﺬیﺮ ﭘﯿﻮﻧﺪﻫﺎی دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪی ﻧﻘﺶ دارﻧﺪ. این پروتئین‌ها توسط آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز توسط مولکول گلوتیون احیا می‌شوند. سپس این پروتئین خود در احیای باندهای دی سولفیدی پروتئین‌های دیگر دخالت دارد. ایﺰوﻓﺮم‌ﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻔﯽ از <span dir="LTR">Grx</span> در ﮔﯿﺎﻫﺎن وﺟﻮد دارد. در ﭘﮋوﻫﺶ ﺣﺎﺿﺮ ﺗﻮاﻟﯽ ژن کد‌کننده ایﺰوﻓﺮم <span dir="LTR">OsGrx9</span> از ﮔﯿﺎه ﺑﺮﻧﺞ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﺑﯿﺎﻧﯽ <span dir="LTR">pET28a</span>، ﻫﻤﺴﺎﻧﻪ‌ﺳﺎزی و ﺳﭙﺲ ﺑﻪ ﺳﻮیﻪ‌ی ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﺑﺎﮐﺘﺮی اﺷﺮیﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ ﺑﻪ‌ﻧﺎم (<span dir="LTR">DE3</span>) <span dir="LTR">Rosetta</span> ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﺪ. ﺑﺎ ﺗﺤﺮیﮏ ﭘﺮوﻣﻮﺗﺮ <span dir="LTR">T7</span> ﺑﻪ‌وﺳﯿﻠﻪی <span dir="LTR">IPTG</span>، ﻣﯿﺰان ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ<span dir="LTR"> His-OsGrx9 </span>در فاز محلول باکتری ﺗﻮﻟﯿﺪ شد و سپس ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از روش ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ تمایلی ﺧﺎﻟﺺ‌ﺳﺎزی ﺷﺪ<span dir="LTR"> .</span>ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ اﺣﯿﺎیﯽ این ایﺰوﻓﺮم ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از اﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﺑﻪ‌ﻋﻨﻮان ﺳﻮﺑﺴﺘﺮای اﻟﮑﺘﺮون ﮔﯿﺮﻧﺪه و حضور <span dir="LTR">&nbsp;DTT</span>یا <span dir="LTR">GSH</span> ﺑﻪ‌ﻋﻨﻮان عوامل اﺣﯿﺎ‌ﮐﻨﻨﺪه مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که <span dir="LTR">Grx9</span> در محیط این ویترو به‌خوبی فعال می‌باشد<span dir="LTR">.</span> به‌نظر می‌رسد فعالیت این پروتئین در حضور <span dir="LTR">GSH</span> کاملا وابسته به <span dir="LTR">pH</span> محیط می‌باشد. </span></span></h1> Glutaredoxins (Grxs) are low-molecular-mass proteins with two cysteins in their active site which are involved in reversible reduction of disulfide bonds. The reduction of Grxs is catalyzed by glutathioen reductase via glithathione. Plants contain several isoforms of Grx. In this study we aim to heterologously express OsGrx9 in <em>E.coli</em>. To this end the gene encoding OsGrx9 was cloned in pET28a.&nbsp; The new construct pET28a-OsGrx9 was transformed to Rosetta (DE3).&nbsp; After inducing T7 promoter with IPTG, proper amount of recombinant proteins were produced in soluble fraction. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography and was analyzed for its ability to reduce Insulin &ndash; an electron receptor substrate for Grxs. For this reaction we used DTT or GSH as reducing agent. The results show that OsGrx9 is able to reduce insulin <em>in vitro</em> and the rate of insulin reduction is pH-dependent. اشریشیاکلی برنج بیان هترولوگ گلوتاردوکسین Glutaredxin, Escherichia coli, Heterologous expression,Rice 55 61 http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-1-9&slc_lang=fa&sid=1 E Shaikholeslam Esfahani احسان شیخ الاسلام اصفهانی 1003194753284600175 1003194753284600175 No گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه صنعتی اصفهان، اصفهان A Shahpiri آذر شاه پیری a.shahpiri@cc.iut.ac.ir 1003194753284600176 1003194753284600176 Yes گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه صنعتی اصفهان، اصفهان