Norouzi M, Nazarian Firouz-Abadi F, Ismaili A, Ahmadvand R. Investigating the effect of StMAPKKKε gene editing using CRISPR technology against Phytophthora infestans. MGj 2023; 18 (1) :1-12 URL: http://mg.genetics.ir/article-1-1781-fa.html
نوروزی محسن، نظریان فیروزآبادی فرهاد، اسماعیلی احمد، احمدوند رحیم. بررسی اثر ویرایش ژن MAPKKKε سیب زمینی با استفاده از فناوری CRISPR در مواجهه با Phytophthora infestans. فصلنامه علمی ژنتیک نوین. 1402; 18 (1) :1-12
کینازهای فعال شونده با میتوژن (MAPKs)، از آبشارهای پروتئینی مهم، در درون سلولهای یوکاریوتی هستند که نقش کلیدی مهمی در مسیرهای سیگنالینگ ایمنی در جانوران عالی بازی میکنند. آبشارهای پروتئینی مسیر MAPK، دارای ژنهای متعددی هستند که در این میان، ژنهای MAPKKK در بالادست آبشار کینازی قرار دارند و از اینرو در دریافت پیام از پروتئینهای غشایی نقش اساسی را بازی میکنند. ژن MAPKKKε، تنظیم کننده مثبت مرگ سلولی مرتبط با ایمنی در سلولهای گیاهی میباشد. شبه قارچ infestansPhytophthora یک اوومیست بیماریزای گیاهی است که باعث ایجاد بیماری سوختگی دیررس سیبزمینی میشود. این قارچ پروتئینهای افکتور RXLR را جهت تعدیل سیگنالهای ایمنی میزبان و بالا بردن شانس کلونیزاسیون خود به داخل سلولهای گیاهی تزریق مینماید. افکتور PexRD2 از گروه RXLRها، با دومین کینازی پروتئین MAPKKKε، تعامل دارد و بنابراین بهنظر میرسدکه از آن بهعنوان یک ژن حساسیت استفاده میکند. بهمنظور ایجاد جهش در ژن MAPKKKε، از یک سیستم CRISPR/Cas9، با بیان هم زمان چهار RNA راهنما (gRNA)، استفاده شد. تعداد 35 لاین تراریخت به کمک سیستم CRISPR/Cas9، در جریان کشت بافت باززایی شدند که بهترتیب در سه و دو لاین حذف و اضافه شدگی قطعات بهوسیله PCR و سپس توالییابی تایید شد. لاینهایی با سه آلل جهش یافته در ژن MAPKKKεگیاه سیبزمینی تولید شدند. در این لاینهای تراریخت، میزان بیان ژن MAPKKKε حدود 70 درصد کاهش یافت که به دنبال این موضوع، حساسیت به infestansP. در گیاهان تراریخت افزایش پیدا کرد. نتایج این مطالعه نشان داد که ویرایش ژن MAPKKKε بهطوری که تعامل آن با افکتور PexRD2 مختل گردد، موجب افزایش حساسیت به infestansP. میشود. این یافته بر این موضوع دلالت دارد که MAPKKKε نقش مهمی در مقاومت گیاه سیبزمینی به infestansP. دارد و لذا میتوان از این ژن برای افزایش مقامت به بیماری بلایت سیبزمینی در برنامههای بهنژادی استفاده نمود.